Взятие крови для исследований рекомендуется проводить натощак или через 3 ч после приема пищи из локтевой вены в положении сидя. При взятии крови для диагностики сифилиса кровь набирают в стерильную пробирку с пластиковой пробкой. У детей младшего возраста возможно взятие крови для получения сыворотки из ногтевой фаланги среднего пальца в объеме 0,5–1,0 мл. Пуповинную кровь получают во время проведения кордоцентеза. Менструальную кровь собирают с помощью колпачка Кафка. Время хранения образцов следует уточнить в инструкциях к используемым наборам реагентов.
Культуральные исследования. Кровь для исследований следует брать до назначения антибактериальных препаратов. Если больной уже получает антибактериальную терапию, кровь следует брать (в зависимости от скорости выведения препарата) через 12–24 час после последнего введения препарата больному.
Кожу над пунктируемой веной обрабатывают 70о спиртом; наносят 2–5% йодную настойку, круговыми движениями, начиная от центра, в течение 30 сек.; после высыхания йодной настойки проводят венепункцию; протирают кожу 70° спиртом.
Сразу после взятия кровь засевают на питательные среды. Посевы крови немедленно доставляют в лабораторию, оберегая от охлаждения.
Выявление ДНК/РНК микроорганизмов, антигенов, специфических антител
Цельная кровь, пуповинная кровь. Взятие крови производится с антикоагулянтом (тип антикоагулянта следует уточнить в инструкции к набору реагентов). При взятии крови для ПЦРисследований в качестве антикоагулянта нельзя использовать гепарин. Закрытую пробирку с кровью следует несколько раз плавно перевернуть вверх дном, чтобы кровь в пробирке тщательно перемешалась. После плавного перемешивания пробирку поместить в штатив.
Хранение образцов
- при температуре 18–25°С – в течение 2 ч;
- при температуре 2–8°С – в течение 48 ч с момента взятия материала. Недопустимо замораживание образцов цельной крови.
Плазма крови. Взятие крови проводят с антикоагулянтом (тип антикоагулянта следует уточнить в инструкции к набору реагентов). При взятии крови для ПЦР-исследований в качестве антикоагулянта нельзя использовать гепарин. Закрытую пробирку с кровью несколько раз переворачивают и хранят при температуре 2–8°С не более 6 ч. Пробирку с цельной кровью центрифугируют при 800–1600 g (3 тыс. об/мин) в течение 10 мин при комнатной температуре. Полученную плазму переносят в сухие чистые пробирки.
Хранение образцов
- при температуре 2–8°С – в течение 24 ч;
- при температуре минус 16–20°С – до 1 мес.;
- длительно при температуре не выше –68°С.
Сыворотка крови. Пробы крови, взятые без антикоагулянта, отстаивают при комнатной температуре в течение 30 мин. После центрифугирования при 800–1600 g (3 тыс. об/мин) в течение 10 мин, перенести сыворотку в сухие чистые пробирки. Образцы с выраженным гемолизом, гипербилирубинемией, липемией не должны использоваться для выявления НК возбудителей инфекции.
Хранение образцов
- при температуре 2–8°С – в течение 5 сут.;
- при температуре минус 16–20°С – до 1 мес.;
- длительно при температуре не выше –68°С.
Допускается только однократное замораживание–оттаивание материала.
Лейкоцитарная фракция крови (выявление ДНК/РНК, микроскопические исследования). Взятие крови проводят с антикоагулянтом (тип антикоагулянта следует уточнить в инструкции к набору реагентов). При взятии крови для ПЦР-исследований нельзя использовать гепарин. Для выделения лейкоцитов крови используют разнообразные способы, основанные на их физических свойствах. К наиболее распространенным относятся выделение лейкоцитов при помощи спонтанной седиментации или в результате центрифугирования с применением градиентов плотности, а также методы селективного лизиса эритроцитов. Выделенную фракцию лейкоцитов немедленно используют для исследований или хранят при температуре не выше –68°С.
Лейкоцитарная фракция крови для диагностики гранулоцитарного анаплазмоза человека, моноцитарного эрлихиоза человека (выявление ДНК, микроскопические исследования). Взятие крови проводят с антикоагулянтом (6 % раствор ЭДТА из расчета 1:20). Для получения лейкоцитарной фракции крови в чистую сухую пробирку вносят 1,5 мл цельной крови и центрифугируют при 50 g в течение 10 мин, после чего верхний слой плазмы (500–600 мкл) с лейкоцитами переносят в другую чистую сухую пробирку и повторно центрифугируют при 10 000 g в течение 10 мин. По окончании центрифугирования надосадочную жидкость удаляют, оставляя 200 мкл плазмы над осадком клеток. Осадок клеток и оставленную надосадочную жидкость используют для исследования. Если в лаборатории нет центрифуг, способных обеспечить ускорение 10 000 g, кровь, взятую с антикоагулянтом, отстаивают при температуре 4–8°С в течение 4–6 ч, после чего переносят верхний слой плазмы с лейкоцитами (500–600 мкл) в сухую чистую пробирку.
Хранение образцов
- при температуре 2–8°С в течение 5 сут.;
- длительно при температуре не выше минус 68°С (перед замораживанием в пробу вносят глицерин (10% от объема), пробирку несколько раз плавно переворачивают для равномерного распределения глицерина во всем объеме пробы).