Краснуха

Особенности лабораторной диагностики инфекций

Краснуха

Краснуха (Rubella) – острая вирусная болезнь, характеризующаяся мелкопятнистой экзантемой, генерализованной лимфаденопатией, умеренно выраженной лихорадкой. Возбудитель – РНК-содержащий вирус, принадлежит к семейству Togaviridae рода Rubivirus. Вирус краснухи обладает тропизмом к эмбриональной ткани, повреждает генетический аппарат клеток, подавляет митоз отдельных клеточных популяций эмбриона и, возможно, оказывает прямое цитопатогенное действие, что значительно нарушает развитие плода.

Краснуха – строгий антропоноз. Источником инфекции является человек с клинически выраженной, атипичной или стертой формой болезни, а также дети с врожденной краснухой, в организме которых вирус может сохраняться в течение нескольких месяцев (до 1,5–2 лет). Наряду с манифестными формами при краснухе встречаются бессимптомные (инаппарантные) формы. Соотношение клинически выраженной краснухи и бессимптомной инфекции у детей составляет 1:1, а у взрослых 1: 2–1: 8. Инаппарантное течение краснухи наблюдается в 5–6 раз чаще, чем клинически выраженное.

До введения в практику активной иммунизации краснуха встречалась в виде эпидемических вспышек с интервалом 6–9 лет. Во время эпидемической вспышки заболевают не только дети, но и взрослые, особенно в организованных коллективах. Иммунизация способствовала резкому снижению заболеваемости. Максимальное число заболеваний регистрируется в апреле–июне. Особую опасность краснуха представляет для беременных вследствие внутриутробной инфекции плода.

Инкубационный период продолжается 15–21 день. Пути передачи: воздушнокапельный, особое значение имеет вертикальный (трансплацентарный) путь передачи краснухи от матери плоду. Больной представляет эпидемическую опасность со второй половины инкубационного периода краснухи, наибольшая заразность приходится на продромальный период и первые дни болезни. Входные ворота – слизистые оболочки верхних дыхательных путей, откуда вирус проникает в ближайшие лимфатические узлы (особенно заднешейные и затылочные), что приводит к их воспалению и увеличению. Больной человек начинает выделять вирус с отделяемым носоглотки за 5 дней до появления сыпи и выделяет 5–7 дней после ее исчезновения. В дальнейшем наступает вирусемия. Гематогенно вирус разносится по всему организму, обладает дерматотропными свойствами, вызывает изменения лимфатических узлов, которые увеличиваются уже в конце инкубационного периода. Попадание вируса в кровь является началом клинических проявлений болезни: лихорадка, катаральные явления (насморк, ангина, конъюнктивит), мелкая пятнисто-папулезная сыпь – экзантема (бледно-розовые или красные пятна, диаметром 2–4 мм без шелушения). Экзантема является характерным проявлением краснухи.

АТ IgM в сыворотке появляются через 1–2 дня после высыпания, через 2–3 недели титр достигает максимального уровня, через 2–3 месяца обычно они исчезают. АТ IgG к вирусу краснухи начинают вырабатываться через 3–4 недели с момента инфицирования с достижением максимального уровня к 8–9 неделе заболевания и выявляются после окончания острого заболевания пожизненно, обеспечивая защиту от повторной инфекции. Однако описаны редкие случаи реинфицирования, которые сопровождаются резким подъемом уровня АТ IgG. После заболевания формируется стойкий пожизненный иммунитет, тогда как после иммунизации у 10 % женщин протективный иммунитет не формируется, в связи с чем целесообразно обследование женщин перед планированием беременности и при наличии показаний для обследования.

Общепринятой классификации клинических форм краснухи нет, но в зависимости от характера инфицирования выделяют приобретенную и врожденную краснуху, которая может протекать в типичной форме и атипично. Атипичная краснуха протекает легко, без экзантемы, она характеризуется легким катаральным воспалением верхних дыхательных путей и умеренно выраженной лимфаденопатией. В таком случае указание на контакт с больным краснухой является основанием для лабораторного обследования.

Приобретенная краснуха протекает циклично в виде острого инфекционного заболевания. У детей заболевание протекает относительно легко. Вначале элементы сыпи появляются на лице и шее, за ушами и на волосистой части головы. В течение суток сыпь распространяется по различным участкам тела без определенной закономерности. Особенно типично расположение сыпи на спине, ягодицах и на разгибательных поверхностях верхних и нижних конечностей. Подошвы и ладони не поражаются. Почти одновременно с распространением сыпь начинает угасать, полностью исчезая за 1–3 дня, не оставляет после себя пигментации. Позже может присоединиться увеличение задне-шейных и затылочных лимфатических узлов, незначительная лихорадка, катар верхних дыхательных путей. В 30% случаев краснуха протекает без сыпи, но лимфаденит присутствует всегда.

У взрослых заболевание обычно протекает значительно тяжелее. Высыпанию могут предшествовать продромальные явления в виде общего недомогания, головной боли, озноба с повышением температуры до 38°С, болей в суставах, насморка, болей в горле и, как правило, системного увеличения лимфоузлов, особенно заднешейных и затылочных. Среди осложнений краснухи нередко встречаются мигрирующие артриты. Они возникают после исчезновения сыпи и чаще наблюдаются у женщин (60%). Эти симптомы могут продолжаться в течение 3–4 дней, иногда дольше. Из других осложнений встречаются отиты, пневмонии, тромбоцитопения, проявляющаяся геморрагической сыпью. Редкими, но очень тяжелыми осложнениями, являются энцефалит и энцефаломиелит (чаще выявляются у взрослых) с высокой летальностью – 20–50%.

Клиническая картина краснухи у беременных женщин не имеет особенностей. Заболевание краснухой может иметь различные последствия: отсутствие воздействия на плод; инфицирование только плаценты, инфицирование плаценты и плода. Неблагоприятное влияние краснушной инфекции на плод проявляется спонтанными абортами (от 10 до 40%), мертворождением (20%), смертью в неонатальном периоде (10–25%).

Частота и степень поражения плода в значительной степени определяется сроком беременности в момент заражения. Чем меньше срок беременности, при котором женщина заболела краснухой, тем чаще и значительнее проявляются тератогенные действия вируса. Наиболее опасен первый триместр беременности, в период органогенеза. Заболевание краснухой на 3–4-й неделе беременности обусловливает врожденные уродства в 60% случаев, на 9–12-й неделе – в 15% и на 13–16-й неделе – в 7% случаев.

Врожденная краснуха. В первые недели беременности поражение эмбриона происходит через кровь матери и хорион во время общей вирусемии беременной. В дальнейшем после формирования плаценты (14 недель беременности и позже) преобладает трансплацентарный характер заражения. Вирус попадает во время вирусемии в плаценту, где размножается, легко преодолевает плацентарный барьер и инфицирует плод. Через кровь матери из межворсинчатого пространства возбудитель проникает в фетальные сосуды, далее в пупочные сосуды и достигает эндокарда, откуда некротические массы, содержащие активный вирус, гематогенным путем разносятся по всему организму, инфицируя различные органы и ткани плода. Одновременно вследствие вирусного поражения эндотелия кровеносных сосудов плаценты нарушается питание плода. Инфекция вызывает нарушения митотической активности, хромосомные изменения, что выражается в отставании в физическом и умственном развитии. Врожденная краснуха может развиться и после бессимптомной (инаппарантной) краснухи у матери. Степень поражения не зависит от степени тяжести заболевания беременной. Описано несколько случаев внутриутробного инфицирования плода у женщин, перенесших краснуху за 6–12 месяцев до зачатия что, очевидно, объясняется необычайно длительным сохранением вирусов в крови матери.

Течение болезни при внутриутробном заражении значительно отличается от обычной краснухи. Синдром врожденной краснухи (Congenital Rubella Syndrom – CRS) зависит от срока инфицирования. Выделяют классический синдром врожденной краснухи, так называемую триаду Грега (катаракта – 75%, пороки сердца – 50%, глухота – 50%). К синдрому врожденной краснухи принято относить: пороки развития сердца – незаращение артериального протока, дефекты межжелудочковой перегородки, стеноз легочного ствола; поражение глаз – помутнение роговицы, катаракта, хориоретинит, микрофтальмия; характерна также микроцефалия, умственная отсталость, глухота. В последующие годы проявлениями этого синдрома дополнительно стали считать тромбоцитопеническую пурпуру, увеличение печени и селезенки, задержку внутриутробного развития, интерстициальную пневмонию, миокардит или некроз миокарда и поражение костей в области метафиза. Перечень этих проявлений стали именовать расширенным синдромом врожденной краснухи. У некоторых детей выявлялись признаки гуморального и клеточного иммунодефицита, в дальнейшем у лиц с врожденной краснухой развивался сахарный диабет или прогрессирующий подострый панэнцефалит.

При инфицировании плода на ранних сроках развития (особенно опасно заражение в первые 8 недель беременности – в критическую фазу органогенеза) возникают множественные аномалии, являющиеся следствием течения инфекции. Повреждаются сердце, органы слуха, зрения, кости черепа, конечностей. Среди таких младенцев отмечается очень высокий процент перинатальной смертности. Наиболее частыми видами врожденных аномалий вследствие заражения женщины после первого триместра беременности являются глухота (70–90%) и ретинопатия. Несколько реже встречаются гепатомегалия и спленомегалия, геморрагический синдром, гепатит, пневмония. Инфицированные краснухой дети, даже не имеющие пороков развития, часто рождаются с малой массой тела и малым ростом, в дальнейшем отстают в физическом развитии.

При развитии внутриутробной инфекции у ребенка продуцируются специфические АТ IgM, которые сохраняются и в постнатальном периоде (до 6 месяцев), с постепенным появлением собственных АТ IgG. Одновременно у ребенка выявляются АТ IgG, полученные от матери, которые исчезают через несколько месяцев. После родов вирус обнаруживается в плаценте. У больных новорожденных он может обнаруживаться в носоглотке, слюне, моче, кале и выделяться на протяжении 1–2 лет.

Показания к обследованию

• Планирование беременности;
• наличие отягощенного акушерского анамнеза (перинатальные потери, рождение ребенка с врожденными пороками развития);
• беременность (в первую очередь с УЗИ-признаками внутриутробной инфекции, аномалиями развития);
• женщины при рождении ребенка с врожденными пороками развития;
• дети при наличии симптоматики врожденной инфекции, врожденных пороков развития;
• дети, матери которых входят в группу риска по внутриутробной передаче вируса краснухи;
• наличие экзантемы или «краснухоподобной» сыпи;
• установленный или предполагаемый контакт с больным краснухой;
• тромбоцитопения.

Дифференциальная диагностика. При наличии мелкопятнистой экзантемы – аденовирусные и энтеровирусные заболевания, корь, инфекционный мононуклеоз, розовый лишай, лекарственная экзантема, инфекционная эритема; при тромбоцитопении – парвовирусная инфекция В19.

Этиологическая лабораторная диагностика включает выявление вируса в культуре клеток, обнаружение его РНК, определение специфических АТ к АГ вируса краснухи в крови.

Материал для исследования

• Венозная или пуповинная кровь, слюна, носоглоточные мазки, смывы, соскобы; спинномозговая, амниотическая жидкость, ворсинки хориона, плацента – выделение вируса в культуре клеток, обнаружение его РНК;
• сыворотка венозной или пуповинной крови – определение АТ.

Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики. Для выявления вируса краснухи выполняют заражение культуры клеток биоматериалом. Исследование проводят только в специализированных вирусологических лабораториях, длительность – 4–5 дней.

Для выявления РНК вируса краснухи преимущественно используют метод ПЦР. С появлением сыпи РНК вируса в крови и в носоглотке можно обнаружить в течение 7 дней после высыпания. ПЦР-диагностика используется значительно чаще при исследовании отделяемого носоглотки (у контактных лиц), крови, биоптатов, ворсин хориона.

Определение АТ используется для диагностики краснухи, для скрининга в комплексе TоRCH-инфекций и оценки напряженности поствакцинального или противоинфекционного иммунитета. Для ранней диагностики наиболее ценно выявление в сыворотке крови АТ IgМ, которые появляются уже через 1–2 дня после высыпания. Определение авидности специфических АТ IgG к АГ вируса краснухи в крови позволяет оценить сроки инфицирования и дифференцировать острую инфекцию от инфекции, перенесенной в прошлом (от первых дней до 1,5 месяцев и более). Для диагностики первичной инфекции важно определение авидности АТ IgG. Низкоавидные АТ свидетельствуют о первичной инфекции, высокоавидные АТ – исключают возможность протекания острого инфекционного процесса в последние 4–6 недель.

При возможности определения только АТ IgG, целесообразно исследование в динамике, при этом нарастание титра АТ IgG в 4 и более раза будет свидетельствовать о текущей инфекции. Нарастание титра АТ при отсутствии выраженной симптоматики может быть единственным доказательством наличия реинфекции или развития инфекции у вакцинированного лица, при дифференциальной диагностике состояний, сходных по клинике с краснухой.

Показания к применению различных лабораторных исследований и особенности интерпретации результатов у разных категорий обследуемых

Скрининг при планировании беременности часто включает выявление АТ IgМ и АТ IgG. При получении положительного результата выявления АТ IgG и отсутствии АТ IgМ принято считать, что женщина имеет иммунитет (поствакцинальный, если она подтверждает наличие этого, либо постинфекционный – указание в анамнезе на перенесенную краснуху, контакт с больным), напряженность которого достаточна для предупреждения развития плацентита и заражения плода вирусом краснухи в случае инфицирования.

При наличии в анамнезе сведений о контакте с больным краснухой в течение последних 3–6 месяцев для исключения (подтверждения) первичной инфекции важное значение имеет выявление низкоавидных АТ IgG, однако следует учитывать, что у вакцинированных лиц в случае заражения не всегда наблюдается низкий индекс авидности АТ IgG. Для установления текущей инфекции, при наличии сыпи или установленного или предполагаемого контакта с больным краснухой, определяют нарастание титра АТ IgG в динамике, целесообразно дополнительно провести исследования для обнаружения вируса или его РНК.

Скрининг беременных женщин включает выявление АТ IgМ и АТ IgG к вирусу краснухи в крови.

Отсутствие АТ IgМ и АТ IgG у женщины в первом триместре беременности свидетельствует об отсутствии инфицирования, в этом случае исследование повторяют во втором триместре беременности (до 20 недель). При отрицательных результатах двух исследований дальнейший мониторинг не проводится, если нет иных показаний для обследования (контакт с пациентом, имеющим краснуху либо подозрение на нее; наличие сыпи).

Наличие АТ IgМ и отсутствие АТ IgG вв любые сроки беременности чаще свидетельствует в пользу заражения, однако следует исключить ложноположительный результат исследования. Для этого целесообразно определение АТ IgМ к отдельным белкам вируса краснухи с использованием иммуноблота и анализа на вирус краснухи методом ПЦР (обнаружение РНК вируса). Наличие РНК вируса свидетельствует о виремии и подтверждает диагноз краснухи. Также целесообразно исследовать сыворотку крови в динамике через 7–10 дней: повторное выявление АТ IgМ и появление АТ IgG или достоверное (в 4 раза) нарастание концентрации (титра) АТ IgG будет свидетельствовать в пользу текущей инфекции.

Отсутствие АТ IgМ и присутствие АТ IgG – для исключения (подтверждения) первичной инфекции важное значение имеет выявление низкоавидных АТ IgG. В таком случае следует учитывать указание на вакцинацию против краснухи или контакт с больным краснухой либо подозрением на неё. Однако у вакцинированных женщин в случае заражения диагностическое значение данного теста снижено (не всегда наблюдается низкий индекс авидности). Для установления текущей инфекции определяют нарастание титра АТ IgG в динамике.

При возникновении у беременной заболевания, сходного с краснухой, или в случае контакта с больным, женщину необходимо обследовать в кратчайшие сроки. Сложной задачей является распознавание инаппарантной краснухи. Единственным способом выявления бессимптомных форм является лабораторная диагностика – обнаружение вируса или РНК вируса краснухи, АТ IgM и нарастание титра АТ IgG к вирусу краснухи в крови.

При интерпретации результатов лабораторных исследований следует учитывать следующие факторы:

• инкубационный период – с момента контакта до появления сыпи или обнаружения АТ – составляет 14–21 день;
• длительное наложение жгута при взятии крови и плохо перемешанная проба крови приводят к получению неверных результатов

При оценке результата определения специфических АТ к вирусу краснухи в крови следует учитывать иммунизацию женщины до беременности.

Интерпретация результатов лабораторного исследований в течение первых 10 дней от первого дня контакта или 4–5 дней от начала заболевания:

• В крови отсутствует РНК вируса краснухи и(или) АТ IgМ и присутствуют АТ IgG – высока вероятность, что женщина перенесла краснуху в прошлом либо вакцинирована. Контакт с больным угрозу для плода не представляет. Однако для исключения лабораторной ошибки обследование желательно повторить через 7–10 дней. Отсутствие у беременной краснухи – повторное получение таких же результатов (при условии отсутствия нарастания титра IgG). Наличие у беременной краснухи – при повторном обследовании выявлены АТ IgМ, произошло нарастание титра АТ IgG или появились низкоавидные АТ IgG. В качестве подтверждения целесообразно исследовать кровь на наличие РНК вируса, положительный результат свидетельствует о виремии.;
• В крови не выявлены АТ IgМ и АТ IgG – следует провести исследование биоматериала для выявления вируса или его РНК. Положительные результаты обнаружения вируса или его РНК подтверждают диагноз краснухи, отрицательные – исключают его. Также рекомендуется провести контрольное исследование крови через 7–10 дней – обнаружение АТ IgМ к вирусу краснухи в крови, повторный положительный результат дает основание для вывода о наличии краснухи. Для исключения ложноположительных результатов исследования целесообразно определение АТ IgМ к отдельным белкам вируса краснухи с использованием иммуноблота.

Лабораторная диагностика краснухи у плода актуальна только при развитии заболевания у беременной в первые 17–20 недель гестации и целесообразна лишь в сомнительных случаях или при доказательстве реинфекции вирусом краснухи. Для пренатальной диагностики применяют обнаружение вируса в культуре клеток или выявление РНК вируса методом ПЦР в амниотической жидкости, в биоптатах ворсин хориона и плаценте, крови плода, полученной при кордоцентезе.

Лабораторная диагностика краснухи у новорожденных включает определения АТ IgМ в пуповинной крови и крови новорожденного. Обнаружение РНК вируса в ткани плаценты повышает вероятность заражения ребенка, но его отсутствие не исключает диагноза и требует обследование ребенка для выявления РНК вируса и/или специфических АТ. Отсутствие АТ в неонатальный период свидетельствует об исключении диагноза врожденной краснухи, однако в случае иммунологической толерантности результат может быть ложноотрицательным. Целесообразны дополнительные исследования биоматериала для обнаружения вируса в культуре клеток или РНК вируса методом ПЦР. Последующее обследование детей до 1 года жизни включает определение АТ IgM и IgG. Обнаружение IgG указывает на высокую вероятность врожденной инфекции.

Критерии врожденной инфекции:

• выделение вируса или его РНК из содержимого носоглотки, мочи, СМЖ в первые три месяца жизни;
• выявление АТ IgM из крови пуповины вскоре после рождения;
• наличие АТ к краснухе в возрасте до 6 месяцев, особенно на фоне соответствующих клинических проявлений, так как свежеприобретенная инфекция в раннем детском возрасте не встречается.

Кем создан (ID): 1