Легионеллез

Особенности лабораторной диагностики инфекций

Легионеллез

Возбудители легионеллеза относятся к семейству Legionellaceae, роду Legionella, в котором выделяют 50 видов. Выделяют две клинические формы легионеллеза – лихорадка Понтиак, протекающая как острая респираторная вирусная инфекция, и пневмония (болезнь легионеров), возникающая при вдыхании мелкодисперсного аэрозоля воды, инфицированной возбудителем в концентрации 104 и выше микробных клеток в 1 литре. В 90% групповых и спорадических случаев болезни легионеров выделяют вид Legionella pneumophila, причем более 80% связаны с L. pneumophila серогруппы 1, остальные могут быть вызваны L.pneumophila других серогрупп. У пациентов со сниженным иммунным статусом болезнь легионеров может быть вызвана также L.micdadei, L.bozemanii, L.dumophii, L.longbeachae. Возбудитель болезни легионеров распространен в пресноводных водоемах повсеместно в РФ и странах Европы, а также колонизирует внутренние поверхности водопроводного, промышленного и медицинского оборудования с образованием биопленок, устойчивых к действию дезинфицирующих средств. Легионеллы активно колонизируют системы горячего и холодного водоснабжения, централизованные системы кондиционирования воздуха с водным охлаждением, градирни, вихревые бассейны и джакузи массового пользования, увлажнители воздуха, фонтаны. В начале заболевания характерны лихорадка, жалобы на сухой непродуктивный кашель, сильные головные боли, миалгии, колющие боли в груди, одышка. Период лихорадки обычно продолжается 10–15 дней. У 25% больных в начальном периоде наблюдается поражение желудочно-кишечного тракта – тошнота, рвота, боли в животе, диарея. Практически у всех пациентов наблюдается гепатомегалия. У 20–30% больных быстро развивается острая дыхательная недостаточность, требующая респираторной поддержки. В тяжелых случаях определяется симптоматика энцефалопатии: нарушение сознания, дезориентация, дизартрия, мозжечковые нарушения. Почки поражаются вторично. Летальность колеблется от 8 до 40% и зависит от своевременности диагностики, сроков и эффективности этиотропной терапии. Являясь внутриклеточным патогеном, легионеллы чувствительны только к антибиотикам, проникающим через биологические мембраны – современным макролидам и фторхинолонам.

Факторами повышенного риска являются: заболевание в теплое время года; путешествие, совпадающее со сроком инкубационного периода (от 2 до 10 дней до начала заболевания); возраст старше 40 лет; мужской пол; курение; интенсивная системная гормональная или иммуносупрессивная терапия, внутрибольничная пневмония после проведения искусственной вентиляции легких.

Показания к обследованию. Пневмония в сочетании с факторами повышенного риска.

Материал для исследований. Крайне важно проводить сбор материала для ПЦР и культурального исследования до назначения специфической противомикробной терапии. Несоблюдение данного условия может привести к ложноотрицательным результатам.

  • Мазки из носоглотки – обнаружение АГ;
  • мазки из носоглотки и ротоглотки – выявление ДНК микроорганизмов (поражение верхних дыхательных путей);
  • мокрота, плевральная жидкость, БАЛ, биоптаты – обнаружение АГ, культуральное исследование, выявление ДНК микроорганизмов;
  • сыворотка крови – обнаружение АТ;
  • моча – обнаружение АГ.

Этиологическая лабораторная диагностика включает выделение возбудителя в чистой культуре и его идентификацию с определением вида, серогруппы и серовара, обнаружение АГ и ДНК L.pneumophila, выявление специфических АТ.

Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики. Для обнаружения АГ L.pneumophila применяют методы ИФА, ИХА, РИФ (МФА). На сегодняшний момент наиболее эффективным методом диагностики, обладающим диагностической чувствительностью 70–80% и специфичностью близкой к 100% является обнаружение в моче растворимого АГ L.pneumophila 1-й серогруппы методом ИФА. АГ, как правило, начинает выделяться с мочой с 3-го дня заболевания и может обнаруживаться в течение года после перенесенной инфекции. Применение ИХА для обнаружения АГ возможно в формате «у постели больного». Использование РИФ для обнаружения АГ в материале из респираторного тракта демонстрирует общие недостатки данного метода – низкую чувствительность, недостаточную специфичность, субъективность при интерпретации результатов анализа.

ПЦР позволяет обнаруживать ДНК L.pneumophila всех серогрупп со специфичностью 100%, однако применение исследований для рутинной диагностики ограничено необходимостью использования материала из нижних дыхательных путей.

Культуральный метод трудоемок и занимает 4–5 суток, чувствительность высева микроорганизма из мокроты низка, получение образцов для исследования требует проведения инвазивных процедур (бронхоскопия). Исследования по обнаружению АТ (серологическая диагностика) вследствие необходимости использования проб, взятых в динамике (парные сыворотки), носит ретроспективный характер.

Показания к применению различных лабораторных исследований. Для ранней диагностики используется обнаружение в моче растворимого АГ L.pneumophila 1-й серогруппы. Обнаружение ДНК методом ПЦР применяется в диагностических целях при наличии материала из нижних дыхательных путей; при подозрении на заболевание, вызванное L.pneumophila, отличных от 1-й серогруппы; при расследовании случаев летального исхода от пневмонии неясной этиологии.

Особенности интерпретации результатов лабораторных исследований. Согласно нормативным документам (МУ 3.1.2.2412-08), диагноз «легионеллез» в случае острой инфекции нижних дыхательных путей (клинически и рентгенологически подтвержденной) считается установленным при выделении культуры легионелл из отделяемого респираторного тракта или легочной ткани; при определении растворимого АГ L.pneumophila серогруппы 1 в моче методом ИФА; при 4-х или более кратном нарастании титра специфических АТ к L.pneumophila серогруппы 1, определяемых в образцах сыворотки крови, полученных последовательно в острый период заболевания и в период реконвалесценции (спустя 10 дней – 1 месяц). При отсутствии пробы крови, взятой в ранние сроки болезни, выявление достоверно высокого уровня АТ (более 1:128) к L.pneumophila серогруппы 1 только в образце крови, взятом в период рековалесценции, позволяет считать диагноз «легионеллез » предположительно установленным из-за возможности ложноположительных результатов. Диагноз также считается предположительно установленным в случае обнаружения АГ возбудителя методом МФА в материале из нижних дыхательных путей или в моче методом ИХА. Обнаружение ДНК возбудителя методом ПЦР свидетельствует о наличии инфекции, однако согласно МУ 3.1.2.2412-08, диагноз следует считать предположительно установленным. Отрицательный результат выявления ДНК методом ПЦР не исключает наличия инфекции, вызванной L.pneumophila.

Кем создан (ID): 1